IPTG诱导原理（原核表达）
乳糖操纵子结构基因
IPTG诱导原理.
Lac阻遏物是一种具有4个相同亚基的四级结构蛋白，都有一个与诱导剂结合的位点。在没有乳糖存在时，lac操纵子（元）处于阻遏状态，Lac阻遏物（即下图中的阻遏蛋白）能与操纵基因O结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，阻止了转录的路径，从而抑制转录启动。而当有诱导剂（这里指IPTG）存在时，诱导剂可与阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白构象发生变化，导致阻遏物从操纵基因O上解离下来，RNA聚合酶不再受阻碍，启动子P开始发生转录，启动反应开始发生转录。
、IPTG诱导表达实验方法
原核表达鉴定详细实验步骤
拿到质粒，离心（3000r/min；2min) 在质粒中加入TE【使质粒最终加入到110μL感受态细胞中的量为80-100ng，据此确定加入TE的量】，一般为(1μg质粒加20μLTE；2μg质粒加50μLTE；5μg质粒加100μL TE) 将质粒与TE混匀，吸取2μL混液与感受态细胞混匀 将感受态细胞放入冰箱（4℃）中，30min 取出后立即放入水浴锅中（42℃），热激90s, 再次放入冰箱（4℃）中，3min 拿出后取200μL的LB液体培养基加入到已转入质粒的感受态细胞中 放入摇床（37℃; 195r) 中, 30nim至60min; (最佳45min) 取出离心（3000r/min；2min) 去掉200μL的上清，留100μL左右上清悬浮沉淀，吸取50μL悬液涂平板，【先将对应抗性的平板放入培养箱（37℃）中预热20min】 把平板放入培养箱（37℃），过夜（12h至16h）
每个平板挑取单菌落至4支对应抗性的LB(4ml)试管中，编号为“0”“1”“2”“3” 将试管放入摇床（37℃；195r) 中，【单抗3h左右；双抗4h左右；刚开始用可见分光光度计测OD值；熟练后可目测（背光下，以试管中的枪头为例，刚刚看不见枪头即可）】，测OD值（0.6至0.8） 从“0”号管中取700μL悬液加入到100μL（C=80%）的保种甘油中，震匀，放入冰箱（-20℃）冻存 在每组菌的“1”“2”“3”号试管中分别加入2μL的IPTG【终浓度0.5mM最适，可根据日后表达摸索】 视不同的载体选择适合的表达环境【PET/PGEX：15℃表达过夜；25℃表达6h；37℃表达3h至4h（4支试管，“0”“1”号试管15℃表达过夜；“2”“3”试管37℃表达3h至4h）。Pcold：【全部15℃表达过夜】
3.表达鉴定第三天，全菌的表达鉴定分析，注意控制溶质的量及溶液黏度
从每组4支的试管中均取500μL菌液加入到1.5ml离心管中，【若OD值不一样，值小的可多取】离心（6000r/min)，5min, 去上清，留沉淀【沉淀少的，可再取菌液离心，尽量使沉淀量接近】 在每个离心管中加入500μL的DDH2O,悬浮沉淀，离心（6000r/min)，5min, 去上清，留沉淀 在每支离心管中加入45μL的1×PBS和45μL的2×Loading Buffer悬浮沉淀【当溶质适量且均一的情况下，加入量不变；当溶质多且粘稠时，应使加入量增大，为降低粘度也可减少上液量】 放入煮样器（100℃） 25min 取出后离心（6000r/min) 3min, 电泳检测。 蛋白表达量不错，进行蛋白纯化.蛋白表达量低或者没表达就菌株与质粒、诱导条件、目的蛋白特性、培养环境及检测环节五大类来进行排查分析。
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