生物样品前处理方法详解
生物样品前处理是生物实验和分析过程中的一个重要步骤,涉及到从生物体或者环境中提取、纯化、浓集目标分析物,以便于后续分析检测。其难点在于如何高效、准确地从复杂的样品基质中提取和纯化低浓度目标分析物,同时保持方法稳定性和重复性。
样品采集
全血
包括液体成分的血浆和分散悬浮于其中的血细胞。
全血不易保存,且血细胞中含有很多干扰物质,仅用于血浆药物浓度太低或血浆药物浓度波动较大、难以控制的药物分析。
血浆
将采集血液置含有抗凝剂的试管中,3000-4000r/min离心,取上清液即为血浆。
一般血浆中药物浓度高于血清,经采血后可立刻离心分离,低温保存;但血浆中蛋白含量较多,在SPE过程可能产生堵塞,其中抗凝物质可能干扰化合物检测。
血清
采血后不加任何抗凝剂,于室温下静置15-30min,待其自然凝结后离心,取上清液即为血清。
血清较血浆相比少了大部分纤维蛋白,颜色较血浆更浅,干扰物质更少。
抗凝剂
品名 | CAS |
乙二胺四乙酸二钾盐二水化合物Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium salt dihydrate | 25102-12-9 |
乙二胺四乙酸三钾二水合物Ethylenediaminetetraacetic acid tripotassium salt dihydrate | 65501-24-8 |
肝素钠Heparin sodium salt | 9045-22-1 |
肝素锂Heparin lithium salt | 9045-22-1 |
氟化钙Calcium fluoride | 7789-75-5 |
草酸钾一水合物Potassium oxalate monohydrate | 6487-48-5 |
柠檬酸三钠盐二水合物Sodium citrate tribasic dihydrate | 6132-04-3 |
样品存储
采样后如需短期保存可4°C冷藏,长期保存则可-20°C冷冻,但需要避免反复冻融。
可根据样品性质加入酶抑制剂、抗氧化剂等。