一、液相色谱柱的清洗简介:迄今为止,反相色谱法是高效液相色谱法中使用最广泛的技术,主要是因为它适用于分析大多数非极性物质以及许多可电离和离子化的化合物,使用反相方法时,必须考虑可能的基质相互作用,当色谱柱被污染时,其色谱行为将与未污染的色谱柱略有不同,污染的色谱柱会产生反压问题。
必须清洁并重建被污染的反相色谱柱,以恢复原始操作条件,通常,样本中包含分析师不感兴趣的内容,盐,脂质,含脂质的物质,腐殖酸,疏水性蛋白质和其他生物物质是一些在使用过程中可能与HPLC色谱柱相互作用的物质,这些物质的保留值小于或等于分析人员的目标。
二、液相色谱柱的清洗所需材料及试剂:
甲醇、氯乙烷、四氢呋喃
三、液相色谱柱的清洗步骤
再生受污染的HPLC色谱柱的关键是了解污染物的性质并找到合适的溶剂进行去除。如果在重复进样过程中由于强保留物质的积累引起污染,则使用简单的步骤去除这些污染物通常可以恢复其色谱行为。有时,在多次操作后,会用90%到100%的溶剂B(双溶剂反相系统中的较强溶剂)冲洗色谱柱,以冲洗20体积以除去污染物。
例如,塔中剩余的脂质可与非水溶剂(如甲醇,氯乙烷和四氢呋喃)一起使用。
四、液相色谱柱的清洗注意事项:
如果使用缓冲液系统,请勿直接切换到强溶剂,突然切换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动系统中的缓冲液沉淀,这可能引起更大的问题,例如柱头堵塞,管道堵塞和泵堵塞,泄漏,活塞损坏或喷射阀轴故障,应首先使用无缓冲流动相(即,将缓冲液更改为水),冲洗5至10体积后,更换强溶剂。