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发布于 2024-11-07
细菌生化检验实验
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一、细菌生化检验实验介绍
石蕊既是pH指示剂又是氧化还原指示剂。在酸性溶液(pH 4.5)中为红色,在碱性溶液(pH 8.3)中为蓝色。介质的自然色应为紫蓝色(pH 6.8)。石蕊可以被某些细菌还原为无色基质。
牛奶含有乳糖和三种主要蛋白质,即酪蛋白,牛奶蛋白质和乳球蛋白。
牛奶凝结主要是由含有凝乳酶的细菌引起的,凝乳酶可将酪蛋白转化为酪蛋白,或由于乳糖发酵产生大量酸而导致酪蛋白沉淀。
一些细菌产生脂肪酶,脂肪酶可以分解牛奶中的脂肪,形成黄色透明液体。
一些细菌具有酪蛋白水解酶,可以催化酪蛋白水解,最终将其转化为透明的液体酪蛋白沉淀。此过程称为肽化。


二、细菌生化检验实验试剂

序号产品CAS号备注
1脱脂奶粉

2石蕊1393-92-6
3

4乙醇64-17-5


脱脂奶粉100.0克石蕊属1000.0 mL


三、细菌生化检验实验步骤
将奶粉完全溶解在水中,调节至pH 6.8,添加石蕊溶液,直到其呈现紫蓝色(pH 6.8),分成试管,每管约5 mL。在115°C下灭菌10分钟,迅速冷却,然后放入冰箱中以备后用。
石蕊溶液的制备方法:称取2.5 g石蕊,在碗中研磨,转移到装有40%乙醇水溶液的50 mL烧瓶中,煮沸1分钟,静置约10分钟,吸取上清液并将其转移到另一个在烧瓶中,向原始烧瓶中加入50 mL 40%的乙醇水溶液,煮沸1分钟。
将上清液添加到之前的上清液中,将两种上清液均匀混合,离心沉淀,将上清液倒入100 mL量筒中,用40%乙醇补足100 mL,并逐滴加入1 M盐酸直至溶液呈紫色,这是2.5%的石蕊溶液。
95%乙醇42.1 mL加水至100 mL是40%乙醇溶液。
3.测试方法
接种受试细菌的18-24小时培养物。如果是厌氧菌,则在培养基试管中加入无菌铁屑或指甲,并盖上无菌凡士林,然后在36±1℃下培养。 -14天。


四、细菌生化检验实验结果的判断
1.粉红色:将乳糖发酵产生酸;
2.紫色蓝色:乳糖经过发酵并保持其原始颜色;
3.蓝色:碱性反应,乳糖发酵,细菌分解培养基中的含氮物质产生碱性物质;
4.白色:石蕊恢复了;
5.澄清:消化乳蛋白(蛋白糖化);
6.凝块会凝结:由于大量的酸产生,牛奶和鸡蛋会凝结。
7.产气:乳糖分解产生酸和气体,强烈的发酵会破坏血凝块。
如果没有脱脂奶粉,则将新鲜的牛奶放在冰箱中过夜,去除奶油层,在流动的蒸汽中加热和消毒脱脂奶1小时,冷却至10摄氏度以下,用无菌纱布过滤,然后添加石蕊溶液直至熏衣草,分开试管并与以前一样消毒。


作者:未知 来源:未知
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