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发布于 2024-08-13
如何使用D-荧光素钾盐
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荧光素钾盐使用说明:
D-荧光素钾盐(K+)设计用于体外和体内生物发光测定。D-荧光素钾盐一般为黄绿色,激发波长为494nm,发射波长为521nm。D-荧光素的质量和纯度对于获得良好和可重复的结果至关重要。


二、D-荧光素钾盐的使用方法:

1. 溶液的制备
D-荧光素钾盐的溶液可以用于染色、标记、检测等多种应用。
制备D-荧光素钾盐溶液的方法:
a.首先称取适量的D-荧光素钾盐,加入适量的去离子水中后进行均匀搅拌;
b.使用过滤膜将溶液过滤,除菌。
c.将D-荧光素钾盐溶液调节至所需要的浓度。

2. 染色实验过程
D-荧光素钾盐可以用于细胞染色、组织染色等染色实验,实验方法如下:
a.首先将细胞或组织样本固定在载玻片上。
b.然后加入适量的D-荧光素钾盐溶液,使试剂溶液可以覆盖样本。
c.在黑暗条件下可以孵育一段时间,使D-荧光素钾盐充分渗透入细胞或组织中。
d.使用PBS缓冲液洗涤样本,去除多余的D-荧光素钾盐。
e.在显微镜下观察样本,观察样品的荧光信号。

3. 实验标记
D-荧光素钾盐也可以用于标记蛋白质、核酸等生物分子。
实验标记方法:
a.首先将蛋白质或核酸与d-荧光素钾盐共同孵育。
b.再用凝胶电泳等方法分离标记后的生物分子。
c.最后在荧光显微镜下观察标记后的生物分子即可。

4. 检测方法
D-荧光素钾盐可用于检测生物分子的存在和浓度。
D-荧光素钾盐检测方法:
a.将d-荧光素钾盐与待检测的生物分子进行共同孵育。
b.用凝胶电泳等方法分离孵育后的混合物。
c.在荧光显微镜下观察荧光信号,即可判断生物分子的存在和浓度。


1.说明
1.1.简介及特点
D-荧光素,钾盐是一种合成萤火虫荧光素。这种高纯度、无内毒素的产品
非常适合体外和体内生物发光测定。高质量的基板消除了可能由于内毒素的存在而干扰测定。中性条件下的正确包装确保了产品的完整性和稳定性。这种萤光素酶的水溶性基质是现成的,易于使用。
主要特点有:
•高纯度>99.5%
•溶解性好,灵敏度高
•用于生物发光测定的可靠体内报告基因
•不含内毒素(非常适合体内应用)
•适用于体外实验
•易于使用
•在整个动物体内快速和更容易分布


-荧光素,钾盐:
−化学名称:4,5-二氢-2-(6-羟基-2-苯并噻唑基)-4-噻唑羧酸钾盐
−分子式:C11H7N2O3S2K
−分子量:318.42 g/mol
−CAS编号:115144-35-9
−分子生物学等级和高级纯度:99.7%纯度。通过九个独立标准验证质量包括HPLC和FTIR。


1.2稳定性和储存
※ D-荧光素对光、氧气和水分敏感,呈粉末状和溶液状。
※ 储存(粉末)收到并长期使用后,将粉末储存在密闭的干燥容器,-20°C。D-荧光素在-20℃下至少稳定一年干燥和中性气体条件。
※ 如果装有D-荧光素粉末的瓶子必须反复打开和关闭,建议用惰性物质填充小瓶气体(氩气或氮气)。
※ 储存(溶液)D-荧光素储备溶液可以在水中或D-PBS中制备,然后在-20°C下冷冻或优选在-80°C下。D-荧光素溶液的稳定性是相当有争议的
※ 解决方案:尽管存在以上问题,冷冻的D-荧光素溶液(-80°C)仍然适合使用,D-荧光素是在低pH(<6.5)和高pH(>7.5)下相当不稳定。为了避免重复的冷冻和解冻循环,我们建议用小管等分D-Luciferin溶液,并将其储存在-80°C下。


2.应用
※ 活细胞、组织和动物模型中的生物发光测定
※ 萤光素酶报告基因测定
※ 全动物成像(体内和体外基因测定)
※ 荧光素酶基因实验
※ ATP测定(萤光素酶催化ATP转化为AMP)和免疫测定
※ 焦磷酸测序
※用于序列基因分析实验

作者:未知 来源:未知
2024-08-21
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