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发布于 2022-09-08
蛋白酶K产品性质与注意事项
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产品描述:
Proteinase K(蛋白酶K)是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶,其相对分子量约为29.3 kDa,可切割脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。Proteinase K应用广泛,可用于制备脉冲电泳的染色体DNA,蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶等实验,而变性剂如SDS(1%)可提高其活性,常用工作浓度为50-100 µg/mL,根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH、温度等因素确定具体的工作浓度。
 
产品性质:
1)本品来源于基因重组酵母菌株;
2)纯度(Native PAGE电泳检测):≥95%;
3)比活性值(Specific activity):≥30 U/mg蛋白;
4)不含RNase和DNase;
5)在尿素和SDS中活性稳定存在;
6)在较广的pH范围内(pH 4.0 – 12.0)均有活性,最佳pH范围为pH 7.5 - 9.0;
7)反应条件:反应缓冲液中37℃ - 70℃温育1 h。推荐反应温度选择70℃;
8)活力单位定义:在37℃,pH 7.5的条件下,每分钟释放1 µM酪氨酸所需要的Proteinase K量定义为1个活性单位;
9)失活方法:反应体系中加入PMSF或DFP抑制剂即可失活,65℃温育10-15 min可部分失活。
 
运输和保存方法:
冰袋运输。4℃干燥保存,有效期3年。更长期保存,可置于-20℃冷冻保存。
使用方法
1. 20-40 mg/mL Proteinase K储存液的配制
1)将干粉溶解于稀释缓冲液中,配制成40-80 mg/mL原液;
【注】:稀释缓冲液配方:20 mM Tris-HCl (pH 7.4), 1 mM CaCl2。
2)使用低蛋白吸附的0.22 µm滤器过滤除菌;
3)加入等体积无菌甘油,配制成含50%甘油的Proteinase K储存液。
【注】:Proteinase K储存液4℃保存1年。若需反复使用,需分装保存。

按照核酸提取说明书添加指定量Proteinase K储存液即可。

 
注意事项:
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)启用后如需反复使用,需置于-20℃~-80℃冰箱冷冻或者配制成溶液后过滤除菌分装保存。
3)本产品仅作科研用途!


作者:未知 来源:网络转载
2022-08-23
最近发布
2024-03-11
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