β-半乳糖苷酶是一种重要的糖苷水解酶，在乳制品、食品和制药行业具有潜在应用。该酶由细菌和酵母在细胞内环境中产生。

催化反应

β-半乳糖苷酶的活性端通过“浅层”与“深层”结合基质来催化水解双糖。一价的钾离子（K +），以及二价的镁离子（镁2 +）需要酶的最佳活性。以β-核苷间键为基质经由谷氨酸侧链上的羧基终端裂解而成。 在大肠杆菌中，谷氨酸-461被认为是取代反应的亲核试剂。然而，现在已经知道谷氨酸-461是一种酸[催化剂]。相反的，谷氨酸-537为实际的亲核试剂，他是结合到半乳糖的中间体。

在人类中，是由Glu-268扮演水解反应的亲合试剂。

β-半乳糖苷酶所催化的反应

应用

β-半乳糖苷酶检测常用于遗传学、分子生物学，以及其他生命科学。可用于蓝/白筛检测中，有活性的酶可以用X-gal来进行检测，会在裂解β-半乳糖苷后形成一个深蓝色的产物5-溴-4-淀蓝，并且容易辨识和量化。它的生产可以透过非水解性诱导结构异构物中的异乳糖─IPTG，从lac操作者中结合并释放lac操纵子，从而使转录起始端继续进行。

因为他的高表现性质以及它在衰老细胞中的溶酶体累积的特性。尽管有其局限性，它可被当作一个老化的标志物，借由进行体内和体外在定性和定量可用以测定老化程度。