如何选择缓冲剂？

选择缓冲系统时，缓冲液的pKa变化超过pH单元，缓冲能力明显下降，缓冲系统不得影响蛋白质的活性或DNA的稳定性，避免其他离子的干扰。另外，考虑到温度的影响，温度不仅影响缓冲液，还影响细胞，很多动物细胞在37℃的生理状况下pH为7.07.5，温度下降到0℃时达到8.0。

一、磷酸盐缓冲液的优缺点:

磷酸盐缓冲液是广泛使用的缓冲剂，由于有二次解离，缓冲的pH值范围广，可配置各种pH值的酸性、碱性、中性缓冲液。

优点:

容易配合各种浓度。

适用的pH范围很广。

pH受温度的影响很小。

稀释后pH的变化很小。

缺点:与常见的钙离子、镁离子和重金属离子合成沉淀。

二、Tris缓冲液的优缺点:

Tris缓冲液是生物化学研究中广泛使用的缓冲剂，其本身是弱碱，常用的有效pH在中性范围内。

优点:

碱性强，只有这种缓冲液可以配置从酸到碱的范围pH缓冲液

对生物化学过程的干扰很小，不会沉淀钙、镁离子和重金属离子

因为容易吸收空气中的CO2，所以制作的缓冲液必须密封

该缓冲液对某个pH电极产生一定的干扰作用，因此使用与Tris溶液兼容的电极。

缺点:

pH受浓度影响较大，稀释10倍，pH变化大于0.1。

温度效应大，例如4℃时pH=8.4，37℃时pH=7.4。

三、HEPES缓冲液的优缺点:

HEPES是非离子两性缓冲液，在pH7.27.4范围内具有良好的缓冲能力，常用于生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒和PCR诊断试剂盒。

优点:开放式培养和细胞观察可以维持一定的pH值，对细胞没有毒性作用。

缺点:高浓度时可能对细胞有毒，与其他缓冲剂相比价格稍高。

四、PIPES缓冲液的优缺点:

PIPES是哌喹缓冲液家族的一员，与HEPES属于同一家族。是两性离子Goods缓冲液，在6.1到7.5的pH范围内有效。由于pH范围与HEPES略有差异，因此PIPES的浓度HEPES浓度的一半。

优点:

该缓冲剂不与金属结合，可用于含有金属离子的溶液

可用于色谱分析，电子显微镜固定植物细胞，替代草甘膦缓冲液。

缺点:

溶液的pH值上升到6.5以上时，PIPES的游离酸容易溶解，但PIPES的钠盐容易溶解

使用游离酸形式的缓冲液时，请使用氢氧化钠将其转化为钠盐，以提高在较低的pH下的溶解度

像HEPES一样，PIPES不适用于与氧化还原反应相关的实验。因为它会形成自由基。