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发布于 2022-09-20
谈谈CAPS在蛋白质转膜实验中的应用
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      CAPS是,全称3-(环己胺)-1-丙磺酸,一种有机化学物质,白色结晶粉末,CAS号1135-40-6,是一种生物缓冲剂,常用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒。用于酶化学及HPLC分离碱性药物的缓冲液,在蛋白测序的转膜过程中应用广泛。CAPS缓冲液由CAPS、去离子水组成,调PH到11.0,用于纤连蛋白的纯化。

操作要点:
1、SDS-PAGE电泳:按常规条件进行(CAPS系统:用于>=20KD蛋白;Tris-Tricine系统:用于低分子量蛋白,也可用于高分子量蛋白);
2、甲醇浓度:CAPS电印迹缓冲液中甲醇浓度范围是0-20%(甲醇浓度高,用于低分子量蛋白转印;甲醇浓度低甚至不含甲醇的用于高分子量蛋白的转印;
3、PVDF膜处理:取出PVDF膜,用甲醇浸泡数秒钟,然后放入CAPS电印迹缓冲液中。(注:此后的操作须防止PVDF膜干涸。如果膜变干,须重复本步骤的操作);
4、凝胶处理:取出电泳凝胶,在CAPS缓冲液中浸泡5-10分钟。(注:转移某些强碱性蛋白pI>9.0时,可省略本步骤);
5、安装转印槽子:将滤纸和海绵放入电印迹缓冲液中浸泡一下,然后按海绵、滤纸、PVDF膜、凝胶、滤纸、海绵的次序将电印迹夹层装好,并放入小型电转槽中;
6、转印条件:在50V恒压条件下(100-170mA)于室温下进行电印迹转移,转移时间为0.5-2小时。(注:务必排尽凝胶和PVDF膜之间的气泡。例如对70kD以上的蛋白质须延长转移时间);
7、PVDF膜染色前处理:取出PVDF膜并用去离子水略为漂洗,用甲醇浸泡数秒钟,然后进行染色;
8、膜染色:考马斯亮蓝染色(将0.1%考马斯亮蓝R-250溶于40%甲醇/1%乙酸中)30-50秒(切勿超过1分钟),50%甲醇脱色(勤换脱色液),用去离子水充分洗涤,然后晾干即可.

CAPS缓冲液配制:
1、10xCAPS(100mmol/L)缓冲液配制,方法如下:CAPS,22.13g;加去离子水到900ml;用2mol/L NaOH(约20ml)将pH值调到11.0,然后定容到1L,贮存于4C。
2、CAPS电印迹缓冲液(含10%甲醇的1*CAPS)配制,方法如下:10xCAPS 200ml;加入甲醇200ml;加入去离子水1600ml即可。

其他应用:
CAPS还是制造焊接材料、空调设备和制造的原料;还用于制造烟火:用作分析试剂、热交换载体,也用于制药工业;用于空气调节、烟火、干电池;也用作助焊剂、干燥剂;针对涂料行业,用于水性异氢酸酯固化剂。韵邦医药出售各种生物缓冲剂,包括CAPS、TRIS、BICINE、MOPS等,纯度高>99%,工艺稳定,欢迎各位详询。

作者:未知 来源:网络转载
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