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发布于 2022-10-10
生物缓冲剂应该如何选择,你知道这些优缺点吗?
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如何选择缓冲剂?

选择缓冲系统时,缓冲液的pKa变化超过pH单元,缓冲能力明显下降,缓冲系统不得影响蛋白质的活性或DNA的稳定性,避免其他离子的干扰。另外,考虑到温度的影响,温度不仅影响缓冲液,还影响细胞,很多动物细胞在37℃的生理状况下pH为7.07.5,温度下降到0℃时达到8.0。

一、磷酸盐缓冲液的优缺点:

磷酸盐缓冲液是广泛使用的缓冲剂,由于有二次解离,缓冲的pH值范围广,可配置各种pH值的酸性、碱性、中性缓冲液。

优点:

容易配合各种浓度。

适用的pH范围很广。

pH受温度的影响很小。

稀释后pH的变化很小。

缺点:与常见的钙离子、镁离子和重金属离子合成沉淀。

二、Tris缓冲液的优缺点:

Tris缓冲液是生物化学研究中广泛使用的缓冲剂,其本身是弱碱,常用的有效pH在中性范围内。

优点:

碱性强,只有这种缓冲液可以配置从酸到碱的范围pH缓冲液

对生物化学过程的干扰很小,不会沉淀钙、镁离子和重金属离子

因为容易吸收空气中的CO2,所以制作的缓冲液必须密封

该缓冲液对某个pH电极产生一定的干扰作用,因此使用与Tris溶液兼容的电极。

缺点:

pH受浓度影响较大,稀释10倍,pH变化大于0.1。

温度效应大,例如4℃时pH=8.4,37℃时pH=7.4。

三、HEPES缓冲液的优缺点:

HEPES是非离子两性缓冲液,在pH7.27.4范围内具有良好的缓冲能力,常用于生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒和PCR诊断试剂盒。

优点:开放式培养和细胞观察可以维持一定的pH值,对细胞没有毒性作用。

缺点:高浓度时可能对细胞有毒,与其他缓冲剂相比价格稍高。

四、PIPES缓冲液的优缺点:

PIPES是哌喹缓冲液家族的一员,与HEPES属于同一家族。是两性离子Goods缓冲液,在6.1到7.5的pH范围内有效。由于pH范围与HEPES略有差异,因此PIPES的浓度HEPES浓度的一半。

优点:

该缓冲剂不与金属结合,可用于含有金属离子的溶液

可用于色谱分析,电子显微镜固定植物细胞,替代草甘膦缓冲液。

缺点:

溶液的pH值上升到6.5以上时,PIPES的游离酸容易溶解,但PIPES的钠盐容易溶解

使用游离酸形式的缓冲液时,请使用氢氧化钠将其转化为钠盐,以提高在较低的pH下的溶解度

像HEPES一样,PIPES不适用于与氧化还原反应相关的实验。因为它会形成自由基。


Author:网络转载 Source:西皑信息
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