学会槐米中芦丁的提取、结晶与含量测定
芦丁,也称为芸香苷,是一种广泛存在于植物中的黄酮类化合物。它在槐米中的含量高达12%~16%,是提取芦丁的理想原料。芦丁分子含有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出,因此可以利用这一性质进行提取分离。芦丁易溶于热水和热乙醇,而较难溶于冷水和冷乙醇,这使得重结晶方法成为精制芦丁的有效手段。液相色谱法可用于测定芦丁的含量。
实验试剂
品名 | CAS |
芦丁Rutin, from fructus sophorae | 153-18-4 |
甲酸Formic acid | 64-18-6 |
甲醇Methanol | 67-56-1 |
乙酸乙酯Ethyl acetate | 141-78-6 |
实验步骤
1、芦丁的提取(碱提酸沉法)
1)称取槐米20g,加入沸水400mL及1g硼砂,加热至微沸,调节pH至8~9,保持微沸30min,过滤沉淀,合并滤液。
2)滤液用浓盐酸调pH至4~5,静置12h,过滤沉淀,用冷水洗涤,得到芦丁的粗产物。
2、芦丁的精制
称量粗品芦丁的质量,悬浮于蒸馏水中,煮沸溶解,过滤,冷却滤液,静置析晶,干燥得到精制芦丁。
3、芦丁的纯化
1)称取粗芦丁产品,溶解于甲醇,加入硅胶,进行柱色谱分离。
2)用70%工业乙醇洗脱,收集洗脱液,进行薄层色谱鉴定,合并含芦丁的溶液,蒸馏后冷却析晶,得到纯化芦丁。
4、芦丁的鉴定
1)化学法鉴定:进行α-萘酚-浓硫酸反应、锆-枸实验、盐酸镁粉实验等。
2)薄层色谱鉴定:使用聚酰胺膜和不同展开剂,进行氨熏和三氯化铝显色剂显色。
3)紫外光谱法鉴定:溶解样品于甲醇,进行紫外光谱分析。
4)红外光谱法鉴定:取样品约1mg,进行红外光谱分析。
5)氢核磁共振法鉴定:将芦丁样品与芦丁标准品谱图对照。
5、芦丁含量测定(HPLC法)
1)配制芦丁标准品溶液,进行液相色谱测定,绘制标准曲线。
2)配制芦丁样品溶液,进行液相色谱测定,代入标准曲线计算含量。
实验小贴士:
为什么提取芦丁时用水作溶剂,而重结晶时用乙醇作溶剂?
提取芦丁时使用水作为溶剂是因为芦丁在热水中具有较高的溶解度,而在冷水中溶解度较低。这种溶解度的差异使得芦丁能够在加热时溶解,而在冷却后重新结晶析出,从而实现提取。重结晶时使用乙醇作为溶剂,是因为乙醇可以减少芦丁在溶液中的溶解度,有助于芦丁的结晶析出。此外,乙醇的挥发性有助于在干燥过程中去除溶剂,得到纯净的芦丁晶体。